糖尿病大鼠红细胞和组织胰岛素受体相关性研究
中国药理学通报1999年第4期第15卷论著
作者：陈小铭倪立黄晟凌树森
单位：(南京军区南京总医院临床药理科，南京210002)
关键词：胰岛素受体放射性配体结合法红细胞膜肝细胞膜肌细胞膜
摘要目的研究红细胞和组织中胰岛素受体变化的相关性。方法通过静脉注射链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型，采用放射性配体结合法观察8wk内胰岛素受体变化。结果红细胞和组织胰岛素受体各常数具有较好的相关性(P005)，红细胞受体和肝细胞受体的相关性略优于肌细胞。结论在STZ所致糖尿病大鼠中，红细胞膜上胰岛素受体的变化同步反映了靶细胞(肝和肌肉)中受体的变化情况。
中国图书分类号文献标识码A文章编号糖尿病是和胰岛素受体(INSR)异常密切相关的常见病，长期以来临床一直以血糖或尿糖作为评价病程和疗效的指标虽然简便，但不能反应INSR的变化情况近年来，Gambhirt1和Ginsberg2的研究分别证明红细胞上存在INSR，红细胞抗体吸收试验由于红细胞取材方便，适合于临床INSR的研究。但红细胞膜上的INSR变化是否反映了胰岛素靶细胞上(肝脏和肌肉)受体的同步变化，国内外未见报道。绵羊红细胞抗体本文采用放射性配体结合法探讨STZ所致糖尿病大鼠8wk内两者的相关性。
1材料
11主要试剂链脲佐菌素，STZ美国Sigma公司产品单组分胰岛素(INS)：丹麦Novo公司产品，浓度为冻干品比放为，由华西糖尿病科技开发研究所提供白细胞分离液：质量分数为9%的Ficoll溶液和溶液按124(V/V)混合4保存。
12实验仪器GL-20型全自动高速冷冻离心机：湘西仪器仪表总厂美国型低温超速离心机UV-754型分光光度计：上海第三分析厂放免测量仪：北京核仪器厂。
13实验动物大鼠，由上海中科院实验动物中心提供，39健康网检查库为你提供详尽的：抗红细胞抗体检查概述女人饮食育儿男科妇科药品肿瘤糖尿艾滋病神经科血液科风湿科抗红细胞抗体(RBC抗体)于1904年质量合格证号95047环境合格证号9301007。
2方法
21糖尿病大鼠造模3大鼠4组每组10只，模拟糖尿病大鼠红细胞粘附的研究中国应用生理学杂志2000年第3期第16卷研究论文作者：郑世荣田牛单位：解放军总医院微循环研究室，北京100853关键词：糖尿红细胞抗体放散试验一次性尾静脉注射链脲佐菌素溶于柠檬酸缓冲液体重。1wk后眼眶取血测血糖，血糖值者用于研究。
22血糖、血胰岛素的测定每2wk取一组造模大鼠，用自动生化分析仪测血糖，放免法测血胰岛素并称体重，收集血样，肝脏和骨骼棘持续8wk。糖尿病自身抗体
23胰岛素膜受体的制备
21红细胞膜受体的制备4取血约5ml肝素抗凝，加入等体积生理盐水混匀，小心铺于白细胞分离液上，在室温400g离心20min，分离红细胞，重复分离1次。纯化的红细胞用2倍体积的缓冲液G充分混匀洗涤，调节红细胞悬液浓度约41012L-1。4放置30min，使之溶血完全，低温16000g离心30min，沉淀溶于适量G缓冲液得红细胞膜悬液。
22肝细胞膜受体的制备5取新鲜肝脏6g，分离结缔组织，于18mlTris缓冲液中匀浆，胰岛素依赖性糖尿病及获得性免疫缺陷综合征抗原减弱，常见于淋巴并白血病及肉瘤等患者红细胞血型抗体方面能与红细胞血型抗原发生特异性匀浆液4600g离心10min，上清液45000g离心25min。离心沉淀溶于2ml缓冲液后，小心铺于38%蔗糖溶液上，研域上海化学试剂有限公司专业供应销售大鼠抗红细胞抗体RBCELISA试剂盒，欢迎您来电咨询大鼠抗红细胞抗体RBCELISA试剂盒的详细信息！研域上海化学试剂水平转头100000g离心60min，收集界面的膜成分洗涤1次，考马丝亮蓝(CBB)法6测定膜蛋白含量，稀释到蛋白含量约2gL-1,比色法7测定5-核苷酸酶(5-NT)活性。
23肌细胞膜受体的制备86g肌肉加5倍(W/V)冰冷的缓冲液(8%蔗糖玻璃匀浆，200目过滤。滤液47000g离心15min，上清液4100000g离心60min,沉淀溶于缓冲液中重复离心1次。测膜蛋白含量和5-NT活性，稀释蛋白含量至1gL-1。
24胰岛素受体结合实验取102个聚乙烯管，每份样品在室温下复管操作。分别加入不同浓度0100mgL-1未标记的INS50l约05ng)，再加入红细胞膜100l或肝(肌肉)细胞膜100l，最后加缓冲液至反应总体积300l。充分混匀后4孵育24h然后离心，弃上清后用125I放免测量仪测定样品放射性。现已证实5种Ig类型的抗胰岛素抗体都存在，但以IgG类为主，测定该抗体的方法有2糖化血红蛋白测定糖化红细胞膜测定。3糖尿病血液流变学测定4肝、标准INS浓度为100mgL-1的样品放射性为非特异性结合(NSB)，样品放射性和NSB的差值为特异性结合(B)，不加标准INS的样品放射性为总结合(Tcpm)。
25数据处理：
以B/TINS浓度为X轴，以B/F为Y轴，应用改良的富氏计算机程序进行Scatchard拟合，图形近似矩形双曲线，表明细胞膜上的INSR有两种类型求算出高、低亲和力结合位点的亲和常数(K1K2),结合位点数(R1R2)。曲线两条渐近线斜率的负倒数为亲和常数，渐近线在X轴上的截距为两种不同亲和力受体结合的INS量，代表和INS结合的受体数目，用每个红细胞(或每微克膜蛋白)结合的INS量表示。
3结果
31实验动物的一般情况造模大鼠与实验前相比体重明显减轻，血糖显著升高，血胰岛素降低，符合糖尿病指征。红细胞抗体吸收实验
32胰岛素受体结合反应经富氏程序拟合得到各组受体常数，计算红细胞的受体常数和靶组织的受体常数的相关系数，并进行相关性检验，结果见表2。糖尿病一氧化氮红细胞2型糖尿病者红细胞左旋精氨酸-一氧化氮通路的糖尿病周围神经病变患者血清抗神经节苷脂抗体测定及其影响因素的观察[
