中山医科大学附属第一医院胃肠胰外科
国家自然基金资助，中山医科大学重点学科建设211工程资助
兰平中山医科大学附属第一医院胃肠胰外科
收稿日期
胰岛糖尿病细胞凋亡Fas配体链脲酶素
胰岛素依赖性糖尿病是由于自身免疫反应导致细胞毁损此病进展缓慢，机体很快清除死亡细胞，以致细胞在体内的死亡很难检测到1，体内原位重复性观察细胞死亡非常困难目前，大量的研究集中于体外观察细胞的死亡，如应用IL-，INF-等可抑制高糖诱导细胞分泌胰岛素，但不能证实这些因子如何发挥作用，上海研生生化试剂有限公司专业供应销售小鼠胰岛细胞抗体试剂盒价格，欢迎您来电咨询小鼠胰岛细胞抗体试剂盒价格的详细信息！上海研生生化试剂有限以及在体内细胞是否产生类似的死亡方式我们采用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的X-dUTP缺口末端标记)法原位标记链脲酶素诱导大鼠糖尿病后胰岛细胞病理变化，以期为糖尿病的病因研究及防治提供依据
1材料和方法
11材料SD大鼠12只，体质量200g250g由华西医科大学实验动物中心提供链脲酶素公司)，血糖试剂盒(慈溪康华生化制品厂)，脱氧核糖核酸酶(DNase酶，研域上海化学试剂有限公司专业供应销售人胰岛细胞抗原2抗体/蛋白酪氨酸磷酸酶抗体试剂盒等产品，欢迎来电咨询人胰岛细胞抗原2抗体/蛋白酪氨酸磷酸酶华美公司)，FasL(Fas配体)检测试剂盒(武汉博士德公司)，TUNEL试剂盒公司)包括TUNEL液(末端脱氧核苷酸转移酶)，TUNEL液(x-dUTP：带荧光素的dUTP抗荧光素抗体)，胰岛细胞抗体成色反应液(碱性磷酸酶/坚固红公司)，20g/L的蛋白酶K(Sigma公司)
12方法
选择健康SD大鼠，上海富众(亚平宁)生物科技发展有限公司试剂科技部专业供应销售人胰岛细胞抗原2抗体/蛋白酪氨酸磷酸酶抗体试剂盒优惠现货13817373，欢迎您来电咨询人胰岛于阴茎背静脉注入20g/L链脲酶素(溶于012mol/L的枸橼酸中pH
45)50mg/kg注药后1，24，10d测血糖(酶酚试剂法)连续2次超过，尿糖持续++++(班氏试剂法)，选为糖尿病模型
同时可出现饮水多，体质量下降(注药1wk下降超过15g)，尿量增多且呈酸臭味失水、消瘦反应迟钝
11组织学检测
注射链脲酶素后13，5，7d各取3只大鼠处死后取胰腺胸腺、脾脏，上海众华生物科技有限公司提供多种型号的大鼠胰岛细胞抗体试剂盒，厂家直接供货价格优势明显，本公司提供的大鼠胰岛细胞抗体试剂盒,大经40mL/L的多聚甲醛固定，石蜡包埋行HE染色，及FasL测定、原位胰岛凋亡测定及细胞特殊染色的表达
SABC法测定FasL的表达情况，方法简述如下：切片脱蜡至水，人胰岛细胞抗体试剂盒点击浏览大图供应数量：发布日期：有效日期所在地：已获点击：台2010年10月19日2010年11月18日上海上海市35次以30mL/L
H2O2室温下处理5min10min，微波炉加热至96100持续，滴加兔抗FasL抗体及生物素化山羊抗兔IgG，猪瘟抗体检测试剂盒3720min滴加SABC，37
20min后DAB显色，苏木素轻度复染，阳性细胞呈棕黄色法测定胰岛细胞凋亡
按Gavrieliet
al2所述方法略有改进
组织切片脱蜡水化，2g/L的蛋白酶K消化30min37TUNEL液(TUNEL液10L，液90L充分混和)孵育60min37直接在荧光显微镜下观察或抗荧光素抗体，孵育30min37
坚固红成色，普通显微镜下观察，可见到散在的被标记的凋亡细胞核呈红色在此基础上进行胰岛细胞特殊染色，标记抗体(一抗)免疫印记常用试剂免疫组织化学常用试剂细胞因子免疫学及分子您所在位置首页资料下载猴(Monkey)抗胰岛细胞抗体检测试剂盒采用Mallory三色染色法(MCT)3，细胞被染成橘黄色
封片4保存
2结果
糖尿病鼠胰岛病理变化及凋亡的存在
糖尿病大鼠胰腺HE染色可见胰岛明显变孝萎缩FasL测定胸腺及脾脏内有大量的FasL+细胞，而胰腺内无FasL+细胞存在
TUNEL法标记凋亡细胞发现链脲酶素诱导糖尿病后胰岛内大量凋亡细胞存在，主要位于胰岛的边缘区，而外分泌腺区无明显的凋亡细胞存在在注射链脲酶素后1d即可见胰岛细胞凋亡，3d5d达高峰，处死的3只SD大鼠胰岛细胞均可见明显的胰岛细胞凋亡，经胰岛特殊染色证实凋亡的细胞大多数是胰岛B细胞，7d后凋亡逐渐减少
3讨论
Fas系统的研究是当前免疫学的热点之一FasL除存在于活性淋巴细胞外，胰岛抗体机体组织中主要存在于免疫豁免组织中，Griffithet
al4使病毒感染正常鼠前房后，未发现炎症浸润，而病毒感染缺乏FasL的鼠出现明显的炎性浸润，细胞凋亡试剂盒检测发现眼睛内存在，其通过凋亡减少进入其内的Fas+T淋巴细胞，睾丸组织也有类似现象56
说明FasL在防止炎症反应中的作用
本实验中胸腺及脾脏均存在大量FasL+细胞，可以杀伤任何走近这些组织器官的活性淋巴细胞(表达Fas)，从而使这些组织免于炎性反应，而胰腺中无FasL+细胞存在，易于被炎性细胞毁损，这是否与胰腺易受炎性反应侵害而产生自身免疫性糖尿病或容易发生各种类型的胰腺炎有关另外，尚有一种观点认为7：胰岛细胞可被诱导产生Fas，反而成为FasL+CD4细胞裂解的靶细胞
同时，我们通过对链脲酶素诱导的糖尿病大鼠胰腺进行病理分析及TUNEL标记凋亡细胞，发现胰岛内存在明显的凋亡细胞，通过凋亡使大量的细胞凋亡，从而使胰岛的体积明显变小，最终使胰岛功能丧失，细胞周期检测试剂盒产生糖尿病症状，最近国外也有报道认为自身免疫性糖尿病也是通过凋亡途径毁损胰岛功能1，链脲酶素所至的糖尿病可能是通过诱导胰岛细胞凋亡途径形成的，人体自身免疫性糖尿病可能也是经此途径，是否可通过抑制胰腺局部凋亡而防止或减慢糖尿病的发生，为糖尿病的预防和治疗提供了一条途径
